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本产品由高质量的链霉亲和素(Streptavidin,SA)与超顺磁性纳米级磁珠共价偶联而成，能够快速、高效、灵敏、特异性地与生物素(Biotin)标记的抗体、核酸、蛋白、多肽、凝集素等分子结合。主要用于分离纯化生物素标记的核酸、抗体、蛋白或相关复合物等，用于免疫沉淀(IP)、细胞分选、DNA-蛋白相互作用研究等。本产品的实验流程参考图1。

图1.百奥莱博BalbMag Streptavidin Magnetic Beads (链霉亲和素磁珠)的实验流程图。


Streptavidin的分子量为55kD，可以高度特异性地和生物素(Biotin)结合。Streptavidin和生物素的亲和常数为Kd=10-15M。Streptavidin是一个4聚体蛋白，可以同时结合4个生物素分子。Streptavidin的中文名为链霉亲和素，从Streptomyces adidiniil中纯化获得，和鸡蛋清来源的Avidin(亲和素)在空间结构以及与生物素的亲和力方面具有高度的相似性。和Avidin不同的是，Streptavidin是一种非糖基化蛋白，并且基本不带电荷。Avidin的pI=～10.5，在中性pH条件下呈碱性。由于Streptavidin和Avidin相比在中性条件下不带电荷，因此Streptavidin的非特异性结合比Avidin低很多，这样检测时的非特异性背景就低很多。因此目前在生物素检测时通常使用Streptavidin替代Avidin。

链霉亲和素磁珠在生物医药领域内应用非常广泛，可以特异性地结合生物素标记的抗原或者抗体，作为免疫沉淀、细胞分选、ELISA等反应的载体；结合生物素标记的DNA或RNA片段，从细胞或组织提取物中分离特定的核酸-蛋白质复合物，用于蛋白质与核酸相互作用研究；结合生物素标记核酸探针，用于DNA、RNA杂交实验或mRNA的分离和纯化等；还可用于纯化单链生物素标记DNA寡核苷酸、分离生物素标记PCR产物等。

• 本产品结合量容量高。
  与同类的很多产品相比，本产品具有非常高的结合容量，对复杂样品中生物素标记的分子可以快速进行分离纯化，而且磁珠粒径小，不易产生非特异吸附。本产品每mL磁珠悬浊液含约10mg磁珠，含有≥0.6mg高质量链霉亲和素蛋白，每mg磁珠可结合≥20μg生物素化标记兔IgG，可高效地进行免疫沉淀等实验。
  
• 本产品特异性强。
  本产品可特异性地结合生物素化的抗体、核酸、蛋白、多肽、凝集素等配体分子，获得的产物纯度高，可进一步用于Western、ELISA、Northern、qPCR、质谱分析等一系列后续的分析测试。
  
• 本产品结合生物标记分子速度快，吸附时间短，可快速高效结合配体。
  本产品所使用的纳米级磁珠(~200nm)具有超大比表面积，有效缩短了链霉亲和素与生物素结合所需的时间。缩短操作时间可以避免在长时间操作过程中配体分子的降解，有效保持配体分子的活性及完整性。
  
• 本产品使用便捷。
  本产品储存在特殊保护液中，不含甘油，磁性分离，无需离心。本产品不仅适用于少量样本的检测，也适用于高通量筛选(high-throughput screening)的自动化操作系统，不同操作方法之间一致性高。

浓度	10mg磁珠/mL
粒径	~200nm
磁性	超顺磁性
偶联蛋白	链霉亲和素
分子量	~55kDa (Streptavidin)
蛋白浓度	≥ 0.6mg streptavidin/ml
结合能力 (每mg磁珠)	≥20μg生物素标记的抗体或dsDNA； ≥1000pmol生物素； ≥400pmol生物素标记的寡核苷酸或多肽

组分	200μL	1mL	5mL
BalbMag链霉亲和素磁珠(10mg/mL)	200μL	1mL	5mL
说明书	1份

保存：4℃，有效期2年。长期不使用，可置于-20℃保存更久。

• 本产品需维持pH为6～8，避免高速离心、干燥；请勿长时间将磁珠置于磁场中，否则可能会引起磁珠聚团。
  
• 本产品使用前要适当充分重悬，即颠倒若干次使磁珠混合均匀，混匀操作须轻柔，不宜剧烈涡旋震荡等，避免蛋白变性等。
  
• 在免疫沉淀或纯化时，建议设计阳性和阴性对照组。
  
• 待结合分子的类型、大小及生物素标记方式和程度等都会影响结合效率，建议通过稀释法来确定每种具体应用的磁珠用量，同时可以考虑加大磁珠用量至待结合分子2～3倍摩尔数量以确保结合充分。
  
• 游离生物素会降低本磁珠的结合能力，因此在生物素标记蛋白或核酸后，需要用脱盐柱等方法去除多余的游离生物素。
  
• 蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解或变性。为有效抑制蛋白降解，可以在蛋白样品中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物，例如百奥莱博的蛋白酶抑制剂混合物(通用型，货号：YT964)、蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(通用型，质谱兼容，50X，货号：YTB4017)、蛋白酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用，100X，货号：YT966)、蛋白酶磷酸酶抑制剂混合物(哺乳动物样品抽提用，50X，货号：YTB4018)等。
  
• 如果使用真空泵等仪器吸取上清液，须注意真空泵的吸液强度，以免吸力过大而吸取到聚集的磁珠。
  
• 酸性溶液洗脱时磁珠可能会发生聚集，属于正常现象，不影响磁珠的正常使用。0.1%的非离子型去垢剂(如Triton X-100、Tween-20或NP-40)可有效防止磁珠聚集，并且不会影响磁珠的抗体结合效率。
  
• 酸性溶液洗脱或使用SDS-PAGE洗脱后的磁珠不可重复使用。为了尽量减少链霉亲和素的脱落，无论是手动操作还是自动操作，低pH洗脱步骤都不要超过10分钟。
  
• 高浓度的DTT、巯基乙醇、盐酸胍等对本产品与标签蛋白的结合可能有一定影响，但Western及IP细胞裂解液(货号：YT038)、RIPA裂解液(货号：YT609、YT610、YT611)或NP-40裂解液(货号：YT613)等都完全适用。

• 缓冲液的准备。参考下表，根据具体的实验用途配制相应的缓冲液。
  

  缓冲液	组分	应用
  TBS	Tris Buffered Saline (货号：YTB1280/YTB1282)	Prewash
  Binding&Washing Buffer I (2X)	10mM Tris-HCl (pH7.5),1mM EDTA,2M NaCl,0.01%～0.1% Tween-20	for nucleic acid
  Washing Buffer II (1X)	PBS (pH7.4),0.05% Tween-20,with or without 0.01%～0.1% BSA	for antibody/protein
  DNA/RNA Elution Buffer	95% formamide,10mM EDTA,pH8.2	for nucleic acid
  Acid Elution Buffer	0.1M Glycine (pH2.0)	for antibody/protein
  SDS-PAGE Loading Buffer	SDS-PAGE Loading Buffer (货号：YT620)	for antibody/protein

  
  注1：可根据所结合分子的类型或实验需要，适当调整缓冲液的盐浓度及pH。
  注2：Binding & Washing Buffer I (2X)用于洗涤时须用等体积超纯水稀释至1X。
  
• 链霉亲和素磁珠准备。
  
  • 取磁珠并去除上清。用移液器轻轻吹打以充分重悬链霉亲和素磁珠，取20～100μL置于1.5mL离心管(货号：YTB8001)中待用。使用前置于磁力架上分离1分钟，去除上清。
    
  • 洗涤磁珠。加入1×TBS(货号：YTB1280/YTB1282)至最终体积为约0.5mL，用移液器轻轻吹打重悬链霉亲和素磁珠。置于磁力架上分离10秒，去除上清，完成一次洗涤步骤。然后再按照前述洗涤步骤，洗涤2次。最终去除上清，并根据后续的实验目的，用适量的适当溶液(参考步骤3a或4a)重悬链霉亲和素磁珠。
    
  • 本磁珠及溶液并非RNase-free处理，如果用于RNA相关的应用，在上述洗涤后，用0.5mL DEPC处理过的0.05M NaCl洗涤磁珠2次，每次2分钟；然后再用0.5mL DEPC处理过的0.1M NaCl洗涤一次。根据后续的实验目的，按照初始体积的量，用适当溶液(参考步骤3a或4a)重悬链霉亲和素磁珠。
    注1：通常，每个样品的磁珠用量约为20～100μL。具体可根据生物素标记分子的多少，参考产品主要指标表中磁珠的“结合能力”，计算生物素标记分子的加入量。根据不同的实验目的，可以考虑生物素标记分子的加入量为磁珠载量的1～2倍，使磁珠饱和，即把磁珠充分利用，此时通常实验目的是分离纯化；或者加入磁珠的载量是待分离纯化的生物素标记分子的2～3倍，以确保生物素标记分子能被充分分离纯化，此时通常实验目的是为了对样品中的生物素标记分子进行定量分析。
    注2：多个样品时，可以取总磁珠量合并洗涤处理后再平分到各个样品管中，洗涤液用量须相应增加。
    注3：须避免待用时间过长，导致磁珠干燥。
• 生物素标记核酸的结合和洗脱。
  
  • 磁珠重悬。接步骤2b或2c，用2倍原始磁珠体积的Binding & Washing Buffer I (2X)重悬磁珠。
    
  • 核酸吸附。加入等体积的用超纯水配制的生物素标记核酸样品(加入样品后体积为原始磁珠体积的4倍)，充分振荡混悬，置于旋转混合仪上，室温孵育10～30分钟或4℃孵育2小时。
    注：可通过测定反应前后核酸的浓度，计算结合到磁珠上的核酸量。
    
  • 磁性分离。将离心管置于磁力架上分离1分钟，去除上清。
    
  • 洗涤。取1mL Binding & Washing Buffer I (1X)加入分离得到的磁珠中，充分振荡重悬磁珠。将离心管置于磁力架上分离1分钟，去除上清。再重复洗涤1～2次。
    
  • 洗脱。加入100μL或适量的DNA/RNA Elution Buffer，65℃孵育5min或90℃孵育2min。
• 生物素标记抗体或蛋白的结合和洗脱。
  
  • 抗体或蛋白吸附。加入适量用Washing Buffer II (1X)稀释的生物素标记抗体、蛋白、抗原抗体复合物或蛋白复合物，充分振荡重悬磁珠，置于旋转混合仪上，室温孵育30～60分钟或4℃孵育4～16小时。
    
  • 磁性分离。将离心管置于磁力架上分离1分钟，去除上清。
    
  • 洗涤。取1mL的Washing Buffer II (1X)加入分离得到的磁珠中，充分振荡重悬磁珠。将离心管置于磁力架上分离1分钟，去除上清。重复洗涤3～4次。
    
  • 洗脱。根据目的核酸或蛋白的特点及后续实验要求，可以选择如下方法之一或其它合适方法进行洗脱。
    ① 酸性洗脱缓冲液洗脱。每个样品加入100μL或适量Acid Elution Buffer，混匀后置于旋转混合仪上，室温孵育5分钟。然后置于磁力架上分离1分钟，将上清转移到新的离心管中。洗脱液置于4℃待用，或者-20℃长期保存。
    注1：如果选择酸性洗脱缓冲液进行洗脱，就有可能发生链霉亲和素脱落，需注意孵育时间不要超过10分钟。
    注2：酸性洗脱缓冲液能破坏绝大部分的抗体与抗原的相互作用。但为了确保更好的洗脱效果，可预先用300μL 0.1% Tween-20的水溶液洗涤磁珠1次。
    ② SDS-PAGE Loading Buffer或0.1% SDS洗脱。每个样品加入100μL或适量的1×SDS-PAGE Loading Buffer或0.1% SDS，95℃加热3分钟。置于磁力架上分离1分钟，取上清用于SDS-PAGE电泳或Western检测等。
    注：如果选择SDS-PAGE Loading Buffer或0.1% SDS进行洗脱，那么洗脱液将包含链霉亲和素单体和二聚体、生物素标记抗体或蛋白。

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